分子生物工具书之：大分子纯化-DNA

▋ DNA 分离出来入门

人们今日对 DNA 的系统性，多半是通过多重 PCR、real-time PCR 和对稀有事件的研究来透过的，因此极好分离出来 DNA 非常重要。极好的系统性副产物是取得极好的下游验证结果的必要条件。我们必须认识到 DNA 分离出来系统的工作法则，然后针对紧接著领域选择最适合的药理学操作过程。

DNA 分离出来少见的挑战

● 甲醇样品从而释放 DNA● 将 DNA 小分子与肝细胞内、核糖体、糖类和 RNA 等其他小分子分离出来● 保持 DNA 小分子的无损

DNA ；也各不相同导致的挑战也各不相同。例如巧克力等食品，其中会含有色氨酸的锂，如果这些锂被已分离出来的 DNA 携背著，则有可能抑止下游的验证。从革兰氏阳性生物体中会分离出来 DNA 需要高效的甲醇生物体厚厚的肽聚糖细胞内壁。一定要确保你适用的 DNA 分离出来工具只能应对抽取导致的难题。

温馨提示：肠道和民间组织抽取在适用此前需冷冻保存，以尽量减少核苷酸酶对 DNA 的毁损。在锁住一小部分透过 DNA 分离出来此前需将冻结后的肠道完全混合成。

DNA 分离出来基本工序

DNA 分离出来：甲醇、混合和浇

甲醇：毁损细胞内或民间组织-酶三处理方式-所制造毁损-去垢剂三处理方式

甲醇：使核糖体自体或挽回活性-金属离子去垢剂、加热、过氧化氢、甲醇和胍类-核酸（如核酸 K）

甲醇：使不可逆核苷酸酶-螯合剂（例如 EDTA）-核酸（例如 核酸 K）

混合与浇：分离出来 DNA-消除其他核苷酸（如 RNA）-消除核糖体 •有机提取物 •灶析 •与固两者两者之间表征混合 -硫酸基质 -配位共享柱 -静电微粒

混合与浇：从其他细胞内物质中会分离出来 DNA 的工具

■ 有机提取物

当苯酚或苯酚: 混合成物与细胞内甲醇物混合成时，会形成两两者两者之间：水两者两者之间和有机两者两者之间。极性 DNA 小分子转到极性两者两者之间或「水两者两者之间」，而自体的核糖体和其他细胞内碎片则转到有机两者两者之间。

■ 灶析

灶可以让核糖体硫酸，从而降极低其亲水性，然后自体，自体后的核糖体丧失溶解性从而沉淀；通过离心法消除沉淀的核糖体和细胞内碎片。中会用的灶包括包括氯化钠、乙酸钾或乙酸铵。

■ 与固两者两者之间表征混合

绝大多数的 DNA 分离出来工具主要依据的法则是：通过选择性地与固两者两者之间表征混合, 从而从粗甲醇物中会分离出来 DNA。这类固两者两者之间表征包括硫酸表征和配位共享树脂。多半来说，适用固两者两者之间表征分离出来 DNA 比其他工具用时非常较长、操作非常便捷，因为不需要任何有机溶剂，而且可以微型化和管理系统从而应对问题核苷酸。

与 DNA 混合的固两者两者之间表征一般来说

硫酸基质：DNA 会在高分子量离液灶（例如灶酸胍）依赖于的情况与硫酸混合，但是核糖体不会。可以适用含有乙醇的浇液去掉灶，然后在极低金属离子其中心的溶液（例如 TE 或水）中会除去 DNA。

配位共享柱：分离出来的主要法则是 DNA 中会背著负电荷的磷酸羧基与共享柱上背著正电荷的小分子两者之间作用力。在极低灶条件下，DNA 与表征混合，而核糖体和 RNA（有所各不相同所用的悬浮液）则被浇去掉。DNA 可以用高灶悬浮液除去。

在微粒表面透过的 DNA 静电分离出来：许多物化试剂盒的工作法则是适用静电微粒从溶液中会捕获 DNA。静电微粒可以由硫酸等材料石膏，DNA 的混合和除去有所各不相同灶分子量或 pH。

DNA 、分子量和无损

纯的、完整的 DNA 对于许多下游测出至关重要。中会用风险评估 DNA 的中会用工具是在 260nm 的光波三处（DNA 在该光波下有最小转换成峰）测出抽取吸光度。通过测出 280nm 光波三处的吸光度，并且数值 260nm 与 280nm 三处的吸光度之比，可以验证出分离出来操作过程中会有可能适用到的或残留在抽取中会的其他有机锂。激光染料和 qPCR 是数值 DNA 分子量并确定加工无损的替代工具，主要在本最新紧接著关于核苷酸定量章节透过详细发表意见。

图片；也：普洛麦格